【目的】

牛奶（milk），是最古老的天然乳制品之一。因含有丰富的优质蛋白和钙，牛奶被中国膳食指南推荐为每日营养来源。牛奶中微生物的含量是评价牛奶质量的一个重要指标。如果乳品中微生物含量高，其中的致病菌会导致消费者中毒，为预防和控制奶类中微生物污染，需对牛奶进行全流程、全方面的微生物检验检测。

 

【牛奶分类】

市场上在售牛奶主要包括四类：巴氏杀菌乳（鲜牛奶）、灭菌乳（纯牛奶）、发酵乳（酸乳、风味酸乳）、调制乳。

 

巴氏杀菌乳

巴氏杀菌乳（鲜牛奶），是仅以生牛（羊）乳为原料，经巴氏杀菌等工序制得的液体产品。

 

灭菌乳

灭菌乳（纯牛奶）分为超高温灭菌乳和保持灭菌乳。

超高温灭菌乳指以生牛乳为原料，添加或不添加复原乳，在连续流动的状态下，加热到至少132℃并保持很短时间（一般3-4秒）的灭菌，再经无菌灌装等工序制成的液体产品。

保持灭菌乳指以生牛乳为原料，添加或不添加复原乳，无论是否经过预热处理，在灌装并密封之后经灭菌等工序制成的液体产品。

 

发酵乳

发酵乳可分为酸乳及风味酸乳，指以生牛（羊）乳或乳粉为原料，经杀菌、发酵后制成的 pH 值降低的产品。

 

调制乳

调制乳是以不低于80%的生牛（羊）乳或复原乳为主要原料，添加其他原料或食品添加剂或营养强化剂，采用适当的杀菌或灭菌等工艺制成的液体产品。

 

【乳制品检测标准】

不同种类的奶执行的国家标准不同，具体的检测项目也有差异，但检测项目的检验方法均参照GB 4789中的相关标准参照执行，如沙门氏菌的检验方法为GB 4789.4，乳酸菌数的检验方法为GB 4789.35。常见的检测项目有沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠菌群等。

 

《GB 19645-2010 食品安全国家标准 巴氏杀菌乳》

 

《GB 25191-2010 食品安全国家标准 调制乳》

 

《GB 19302-2010 食品安全国家标准 发酵乳》

 

【牛奶中微生物检测流程】

 

第一步：样品稀释

▶液体：取25ml样品，置于225ml稀释液中，制成样品匀液。

▶固体/半固体：取25g样品，置于225ml稀释液中，用拍击式均质器拍打1min~2min，制成样品匀液。

 

适用仪器1：DW-JURAY系列 微生物样品自动重量稀释仪

仪器用于食品、药品、化妆品等含微生物样品的前处理自动稀释，仪器可自动计算并完成对任意重量样品的准确稀释，使工作简易化，提高效率。

 

产品优势：

1、智能计算：样品袋内样品重量不确定，但仪器无需人工计算即可根据稀释比例自动加入稀释液；

2、灵活运用：仪器仅重6.5kg，支持在实验室随时搬运；可通过触摸面板指令进行编程设置，定制稀释程序，简化仪器操作；

3、可追溯性：实验数据存于内置微处理器，可导出包括日期、时间、样本重量、稀释因子、稀释液编号等在内的信息记录；

4、无菌保证：稀释液只经过可灭菌分液管路，避免稀释液污染和样品污染。具备可拆卸托盘，方便清洗。

 

适用仪器2：DW-4型 拍击式均质器

仪器是微生物实验室进行“样品匀液”制备的最佳工具，可对样品进行均质处理，独有的静音设计可使您摆脱噪音困扰。

 

产品优势：

1、界面友好：大屏幕液晶控制面板，可实现快速操作和简易编程，为不同的样品设置不同的拍击速度和均质时间；

2、混合均匀：经验证可有效混合样品，使制备出的样品匀液中微生物含量可充分代表原始样品的微生物含量水平，保障后续检测；

3、无菌保证：配合专用无菌均质袋，样品匀液可直接取样分析，无交叉污染。

 

 第二步：梯度稀释/增菌

▶梯度稀释：取1ml 1:10样品匀液注入9ml稀释液中，制备1:100样品匀液。重复操作，制成递增系列稀释样品匀液。

 

▶增菌：使用适当培养基，对目标菌株进行增菌培养。

 

适用仪器：DW-9系列 微生物试剂分液器

仪器主要用于微生物试剂分装和培养基制备，能够准确、快速地完成对试剂的自动分装（1L溶液分装至100支试管中仅需2分钟），广泛运用于各种食品、药品企业和政府检测机构的专业微生物实验室。

 

产品优势：

1、分装快速：1L溶液分装至100支试管中，最快仅需2分钟；

2、自动分装：可按需编程单次分装总量、分装次数等信息，实现循环自动分装；

3、选择多样：采用防滴漏设计的分液泵头，配备不同直径的分液管，可分装培养基、缓冲液和稀释液等多种微生物试剂，保证精确的分液精度；

4、无菌保证：采用分液管与分液泵分离的设计，使流体只经过可灭菌的分液管，杜绝污染可能。

 

第三步：培养

选择适当的培养基，接种样品匀液，设定合适的培养温度及培养时间，进行培养。

 

适用仪器：DW-100A-K系列 智能厌氧微生物培养系统

DW-100A-K系列智能厌氧微生物培养系统，广泛服务于食品安全标准检测所需的厌氧菌（如产气荚膜梭菌、乳酸杆菌、双歧杆菌）培养和微需氧菌（如空肠弯曲菌）培养；还可根据实验需要选择特定氧气浓度（1%-15%可选）和CO₂浓度（5%-15%），开展厌氧菌最佳培养条件研究。可广泛应用于疾控、市场监督检验机构、科研实验室、食品企业等各类检验场所。

 

第四步：菌落计数/菌种鉴定

▶菌落计数：选取菌落数在适宜范围间、无蔓延生长的平板统计菌落总数，可用肉眼观察，必要时用放大镜或自动菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。

▶菌种鉴定：观察菌种表型特征，结合生理生化实验判断菌属，此过程可使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。

 

适用仪器1：DW-2系列 菌落计数器

DW-2系列菌落计数器为数显式半自动细菌检验仪器，由计数器、放大镜、专用探笔和计数池等部件组成，是杭州大微专为“经典培养法”微生物实验中的“菌落计数”环节而设计制造的最新一代产品。DW-2A型除主机自带计数笔外，另外加配1支可移动、可单独计数的数显半自动菌落计数笔，实现“一机两用”。该产品广泛用于食品安全、饮料、药品、生物制品、卫生用品、饮用水、工业废水的细菌数检验，为各类微生物实验室“菌落计数”所必备之基础仪器。

 

适用仪器2：DW-V型 全自动菌落计数仪

DW-V系列全自动菌落计数仪用于对微生物的菌落进行快速读数和统计，能快速提高统计效率，减少人为误差，广泛应用于高校科研单位、疾控中心、质检系统、商检系统、药品检验机构、环境监测部门、自来水公司，以及食品、药品、乳品企业等，是现代微生物检测实验室先进和高效的全自动菌落计数器。

 

适用仪器3：DW-M80型 自动微生物生化鉴定系统

DW-M80型自动微生物生化鉴定系统通过生化反应原理（包括酶底物反应/糖利用反应/同化反应/氨基酸实验等）捕获细菌的生化表型特征，对微生物进行鉴定。系统可用于食品安全微生物检验国家标准GB4789系列所要求的食源性致病菌分离鉴定；可用于《国家食源性疾病监测工作手册》所要求的食源性致病菌耐药性分析。广泛应用于市场监督管理部门、海关出入境检验检疫、疾病预防控制、食品安全、制药、兽医、渔业水产养殖等微生物实验室。

 

【乳酸菌活菌计数】

目前，我国关于活性益生菌产品中活菌计数主要是参考《GB 4789.35 食品安全国家标准 食品微生物学检验 乳酸菌检验》执行，主要涉及了3种乳酸菌，分别为乳杆菌属、双歧杆菌属和嗜热链球菌属。

该标准采用了培养法来检测食品中的活菌数。其中6.2.3.2是厌氧培养，对双歧杆菌进行计数；6.2.3.3是需氧培养，对嗜热链球菌进行计数；6.2.3.4是厌氧培养，对乳杆菌（或乳杆菌与双歧杆菌）进行计数。

 

【快速检测】

在传统检测流程之外，快速检测法也因快速、高效等优势进入大众视野，为人熟知的有酶联免疫吸附法、PCR法、ATP生物荧光法等。

杭州大微通过将ATP荧光原理与微生物特性相结合，开发了DW-ES800型微生物实时检测系统。

 

适用仪器1：DW-ES800型 微生物实时检测系统

DW-ES800型微生物实时检测系统是新一代的可在食品等固体或饮用水等液体样本中快速定量检测微生物的快速卫生监控系统。该款创新型的系统分为酶-底物反应法培养模块和实时光电检测模块两个部分；培养模块实现30个微生物检测拭子的自动培养，光电检测模块采用了高灵敏度的光电二极管技术和简洁易用的操作设计，是一款灵敏、精确、价格合理的微生物快速检测系统。仪器可用于食品、化妆品、餐饮企业等行业中总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌、细菌总数等指标的快速检测。

 

适用仪器2：DW-BT100型 快速微生物定量检测系统

DW-BT100快速微生物定量检测系统是近10年来问世的最先进的微生物快速自动化定量检测技术。该系统以传统微生物培养理论为基础，将染色、新光源和光子探测技术、二氧化碳传感技术结合在一起，通过双温光电检测系统和计算机控制的模块化分析系统来监控微生物生长代谢所引发的光密度和颜色的变化。该技术的基础是：当目标微生物在特异性的检测管中生长，代谢产物二氧化碳引起检测管 中感光试剂的光谱模式和化学特性发生变化。DW-BT100系统简化了传统微生物的检测方法，也使检测时间得以明显缩短。检测结果可以自动通过网络实时传递到需要检测信息的部门。DW-BT100系统是在一台独立的仪器上可以进行多种微生物检测的系统。该技术目前已被用于原奶、乳制品、食品保健品、化妆品、的微生物检测以及水厂、政府监管部门、科研院所。

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