DW行业解决方案|化妆品中微生物质量控制检验

 

一．目的

用于化妆品微生物指标（菌落总数、霉菌和酵母总数、耐热大肠菌群、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌）检测；

二．参照标准及微生物限量

本方案参照国家食品药品监督管理总局批准颁布的《化妆品安全技术规范》2015版和2022版征求意见稿、SN/T 2098-2008 《食品和化妆品中的菌落计数检测方法-螺旋平板法》。

 

三．组成部分

本方案提供化妆品微生物指标检测所需仪器和培养基及其他试剂。

四．检测流程及方案

流程解读

1.样品采集

2.样品前处理

2.1液体样品：用吸管手动吸取或用自动重量稀释仪自动称重稀释，均质器自动均质后制成1:10检样。按需进行梯度稀释。

2.2 油性液体样品：10g样品+5mL灭菌石蜡油混匀+10ML灭菌吐温80

（40℃-44℃水浴振荡10min）+75ML灭菌生理盐水（40℃-44℃预温），乳化后制成1:10的悬液。按需进行梯度稀释。

2.3 膏、霜、乳剂半固体状样品

2.3.1  亲水性样品：10g样品+ 90ML灭菌生理盐水，均质 1min—2min，静止取上清，上清为1:10匀液。按需进行梯度稀释。

2.3.2  疏水性样品： 10g样品+ 10mL 灭菌液体石蜡 + 10mL 灭菌吐温 80 + 70mL 灭菌生理盐水，均质 3min—5min，制成 1：10 检液。按需进行梯度稀释。

2.3.3  固体样品：称取 10g+90mL 灭菌生理盐水，均质 3min—5min，充分均质混匀，静置后，取上清液作为 1：10 的检液。

总结：化妆品根据与水分子的亲和性及性状的不同，具有不同的类型，包括疏水性样品和亲水性样品以及液体样本和固体样本，相关标准规定不同类型的样品取10g/10mL经过不同的前处理，最终形成1:10的检液。其中，亲水性样本一般选择生理盐水进行稀释，而油性液体样本或疏水性样本稀释液除生理盐水以外，还需添加一定体积的非离子型表面活性剂（如tuwen80）与液体石蜡混合用于样品的乳化过程，从而使微生物更均匀的分散，以便于其检出。此过程一般可通过重量稀释仪和均质器实现。

3. 样品接种

根据化妆品技术规范需要倾注法接种样品，但此法对操作人员的要求较高，而涂布法操作难度低，可预先倒置相关微生物检测的培养基平板，用自动细菌涂布仪涂布接种，上样量可调至100微升。此外，根据SN/T 2098-2008 《食品和化妆品中的菌落计数检测方法-螺旋平板法》，化妆品中菌落计数还可选择螺旋接种法。

4. 样品培养

细菌用恒温培养箱培养，霉菌和酵母菌用霉菌培养箱，培养条件根据微生物种类的不同而不同。

 

 

 

 

表2 不同微生物指标检测培养条件

微生物种类/ 检测指标	培养条件
	温度	时间
菌落总数	36℃±1℃	48h±2h
耐热大肠菌群	44.5℃±0.5℃/36℃±1℃	24h±2h/18h-24h
铜绿假单胞菌	36℃±1℃	18h—24h
金黄色葡萄球菌	36℃±1℃	24h±2h
霉菌和酵母菌	28℃±2℃	5d

 

5.样品检测

微生物定量检测用全自动菌落计数仪实现菌落计数，如样品中菌落总数的测定、霉菌及酵母菌总数；微生物定性检测用自动微生物生化鉴定系统实现，如铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的定性。

五．产品信息

 

表3 化妆品微生物指标检测相关设备列表

序号	设备名称	推荐型号	推荐品牌
1	重量稀释仪	DW-JURAY	杭州大微
2	拍击式均质器	DW-4	杭州大微
3	微生物试剂自动分装仪	DW-9	杭州大微
4	全自动微生物螺旋接种仪	DW-L2000	杭州大微
5	自动微生物涂布接种仪	DW-16	杭州大微
6	全自动革兰氏染色仪	DW-GS100	杭州大微
7	细菌麦氏浊度仪	DW-MF30	杭州大微
8	自动微生物生化鉴定系统	DW-M80	杭州大微
9	全自动微生物菌落计数仪	DW-V9	杭州大微
10	恒温培养箱	BPMJ-150F	上海力康
11	霉菌培养箱	BPH-9162	上海力康
12	水浴振荡器	HTS-10	上海赫田

 

 

表4 化妆品微生物指标检测相关培养基

 

序号	检测指标	培养基名称	规格及货号	推荐品牌
1	细菌总数	TTC卵磷脂、吐温 80 —营养琼脂	250g/瓶, HB5189	青岛海博
2	耐热大肠菌群	双倍乳糖胆盐（含中和剂）	250g/瓶， HB8593	青岛海博
3		伊红美兰（EMB）琼脂	250g/瓶， HB0107	青岛海博
4		胰蛋白胨水	250g/瓶， HB5218	青岛海博
5	铜绿假单胞菌	SCDLP 液体培养基	250g/瓶	广东环凯
6		十六烷基三甲基溴化铵培养基	9cm*10/包， HBPM5184	青岛海博
7		营养琼脂	250g/瓶， HB0109	青岛海博
8	金黄色葡萄球菌	SCDLP 液体培养基（见上）或 7.5%氯化钠肉汤	250g/瓶， HB4119	青岛海博
9		Baird Parker 平板	250g/瓶， HB4115	青岛海博
10		亚碲酸盐卵黄增菌液（Baird Parker 平板添加剂）	5ml*10 ，HB4116-1	青岛海博
11	霉菌及酵母	孟加拉红琼脂培养基	250g/瓶，HB0237-2	青岛海博

 

表5 化妆品微生物指标检测相关试剂

序号	试剂名称	用途	规格及货号	推荐品牌
1	氯化钠	样品前处理稀释	500g/瓶	国药
2	吐温80	样品乳化剂	100ml/瓶，9005-65-6	biosharp
3	无菌液体石蜡	样品前处理	1.7ml*20， GS070	青岛海博
4	Kovacs氏靛基质试剂盒	耐热大肠靛基质实验	5ml*2/盒；HB8279	青岛海博
5	革兰氏染色液	细菌染色	500Ml/瓶，3瓶/套	杭州大微