【厌氧培养技术指南】产气荚膜梭菌培养方法及注意事项

指南目录：

1. 产气荚膜梭菌概况
2. 培养方法
3. 检验注意事项

 

产气荚膜梭菌是一种革兰氏阳性厌氧菌，广泛分布于污水、土壤等环境及人和动物肠道中。既有“荚膜”护体，又可产生“芽孢”休眠，可以抵抗高温、冷冻、高压等各种环境不利条件，待到适宜的生存条件时，便可结束休眠状态，繁殖产毒。

GB 4789.13-2012《食品安全国家标准 食品微生物学检验 产气荚膜梭菌检验》中规定了产气荚膜梭菌的检验流程。

厌氧培养是产气荚膜梭菌检测的关键环节，通过TSC琼脂在36℃±1℃厌氧环境中培养20~24小时，可特异性形成黑色菌落，排除好氧菌干扰并富集目标菌。

 

产气荚膜梭菌培养难点：

1. 对氧十分敏感，暴露在空气中时间过久即死亡
2. 若厌氧环境不严苛，易受其他杂菌干扰
3. 与其他梭菌形态相似，仅凭形态难以区分

产气荚膜梭菌培养流程：

一、样品制备及前处理：

原始样品经初步稀释（25g（mL)+225mL稀释液）均质并系列稀释后（根据样品中菌含量）倾注至TSC琼脂平板进行产气荚膜梭菌厌氧分离培养

 

二、培养：

1、打开DW-100A-K Plus智能厌氧微生物培养系统的电源开关

2、将处理好的平板放入系统配套厌氧罐内，插入厌氧培养专用催化剂，连接罐体与主机

3、选择“厌氧培养”操作程序

4、设备启动，气体置换程序自动运行，90秒后即可生成厌氧环境

5、将培养罐脱离主机，放入36 ℃±1 ℃的环境中培养20-24h

三、得出结论：

可通过生化方法或更为快速简便的[DW-MS 5500飞行质谱微生物快速鉴定系统]进行鉴定

实验操作注意事项：

1、分离培养：TSC琼脂的“双层”接种

在TSC琼脂平板上进行分离时，倾注样品后，务必再覆盖一层培养基，使样本与空气彻底隔绝开；其次可保护亚硫酸盐还原反应不受抑制，避免本该变黑的菌落呈现灰白色，造成误判。

 

2、全程关键：严格维持厌氧环境

由于产气荚膜梭菌对氧气敏感，从分离培养到鉴定操作的整个过程中，必须时刻注意维持厌氧条件，以确保目标菌的存活与生长，避免假阴性结果。

 

实践证明，DW-100A-K Plus智能厌氧微生物培养系统+生物安全柜组合的解决方案，由于系统能够生成严格的厌氧环境、耗时极短，且接种及培养均在生物安全保护下进行，可在兼顾培养效果的同时保障生物安全。

 

因此，DW-100A-K Plus智能厌氧微生物培养系统+生物安全柜组合可作为产气荚膜梭菌检验的日常方案。