【厌氧培养技术指南】弯曲杆菌培养方法及注意事项

指南目录：

1、弯曲杆菌概况

2、培养方法

3、操作注意事项

4、大微实验室验证结果

 

弯曲杆菌（Campylobacter）是一类革兰阴性、弯曲状、高运动性的微需氧杆菌，在人类感染中最常见的病原种为空肠弯曲杆菌（Campylobacter jejuni）和结肠弯曲杆菌（Campylobacter coli）。

空肠弯曲菌显微图

 

弯曲杆菌通常是食物中毒的常见病原体之一，它在低氧环境下生长，可通过动物、食物和水进行传播，常见途径包括未煮熟的禽肉（尤其是鸡肉），生奶或受污染的奶制品，受污染的水或冰等。

弯曲杆菌在血平板上的可疑菌落（确认阳性）

 

对食品中弯曲杆菌的检验主要参照GB 4789.9-2025《食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检验》。

 

 

弯曲杆菌检验步骤：

一、样品前处理

1、取25g生禽内脏样本10倍稀释

2、遵循标准中的一般样本的处理过程，使用均质器进行均质处理

3、滤过液以12000g 4℃离心15min后弃去上清

二、增菌与培养

1、增菌液接种

2、打开DW-100A-K Plus智能厌氧微生物培养系统

3、将处理好的平板放入弯曲杆菌专用的DW-225C培养罐内，连接罐体与主机

4、选择“弯曲菌”操作程序

5、设备启动，气体置换程序自动运行，30秒后即可生成微需氧环境

6、将培养罐脱离主机，放入42℃±1℃培养24h~48h

7、可疑菌种纯化培养

三、鉴定

可通过生化实验、实时荧光PCR或更为快速简便的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱[DW-MS 5500飞行质谱微生物快速鉴定系统]进行鉴定

弯曲杆菌实验操作注意事项：

1、必须严格维持 5% O₂、10% CO₂、85% N₂的微需氧气体环境，气体失衡会直接造成目标菌完全不生长，批量假阴性

2、空肠/结肠弯曲杆菌为嗜热型，全程培养需统一控温42℃

3、关于滤膜操作：膜和平板表面充分贴合，加样后静置等待滤膜上的液滴充分透过滤膜后再揭去滤膜；

4.琼脂平板应采取倒置培养方式。若正置培养，培养基冷凝水、样品残留水分易滴落扩散至菌落生长表面，造成菌落蔓延融合，破坏典型菌落形态，不利于后续可疑菌落的观察与鉴别。

5、弯曲菌对冷冻、干燥、常温耐受极差，样品采集后 2h 内检测，暂存仅 2～8℃冷藏；冷冻会大量致死菌体，直接出现假阴性；高风险肉制品必须缩短室温放置时间。

6、每块平板至少挑取 5 株典型菌落纯化，菌落挑取不足、只使用一种平板是弱阳性样品漏判主要原因。

 

大微实验室验证结果：

1、在本轮实验中同时运用GB 4789.9-2025国家标准法和双孔滤膜法进行实验，结果显示采用国家标准法，空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌均检出；采用双孔滤膜法，结肠弯曲杆菌检出。

2、本实验采用的GB 4789.9-2025国家标准法所用培养基及试剂（0.1%蛋白胨水、弯曲菌增菌液、哥伦比亚血琼脂、卡玛丽血琼脂）均采购于青岛海博。

3、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法可准确鉴定空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌（本实验所运用的验证仪器为DW-MS 5500飞行质谱微生物快速鉴定系统）。